貂肺上皮細(xì)胞的培養(yǎng)方法(四)

　　4）肝細(xì)胞培養(yǎng)

　　初代組織塊培養(yǎng)：取新鮮肝臟，先剝除被膜和血管等纖維成分，用刀或剪刀把肝臟剪成1mm3左右的小塊，采用帖壁培養(yǎng)法。

　　5）內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)

　　1．取產(chǎn)后的新鮮臍帶。如不立即培養(yǎng)可以保存于4℃中，但不宜超過(guò)12小時(shí)。無(wú)菌剪取長(zhǎng)10～15厘米一段。(貂肺上皮細(xì)胞)其它如胚胎和幼體動(dòng)物的大血管，亦可用于培養(yǎng)。

　　2．先用三通注射器吸溫PBS液注入臍帶的靜脈中，洗除殘血，注入口處宜用線繩結(jié)扎，以防液體返流。

　　3．用血管鉗夾緊臍帶一端，從另端向臍靜脈中徐徐注入*終濃度為0.1%的膠原酶，待末端出現(xiàn)液體后結(jié)扎之，令充滿血管，注入口亦應(yīng)結(jié)扎，以防液體返流，消化3～10分鐘。

　　4．吸出含有內(nèi)皮細(xì)胞的消化液，注入離心管中，為獲取更多細(xì)胞，可再注入溫PBS沖洗2～3次徹底清除干凈殘余細(xì)胞，一并注入離心管中離心。

　　5．(貂肺上皮細(xì)胞)吸除上清，加1640培養(yǎng)液，制成細(xì)胞懸液，接種入瓶皿中培養(yǎng)，順利時(shí)2～3天內(nèi)細(xì)胞即可長(zhǎng)成單層。

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